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植物组织培养外植体的灭菌处理

   作者:zhuobo   发布时间:2021-01-14 11:40:32   浏览次数:3

返回:行业资讯

  收集到的外植体在自然环境表面会携带大量的微生物,如不妥善处理,会污染培养基,导致培养失败。所以在适当的季节,适当的母株,以及适当的外植体材料的选择上都需要进行相应的杀菌处理。那么植物组织培养外植体如何进行灭菌处理:

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  1.组培中常用的消毒试剂

  消毒剂使用浓度/%消除难易消毒时间/min灭菌效果次氯酸钠2易5-30很好次氯酸钙9-10易5-30很好漂白粉饱和溶液易5-30很好升汞0.1-1较难2-10最好酒精70-75易0.2-2好过氧化氢10-12最易5-15好溴水1-2易2-10很好硝酸银1较难5-30好抑菌剂2-5中30-60较好

  2.消毒方法

  ①首先,用水冲洗,将收集到的植物材料除去不用的部分,将材料切成适当大小,即灭菌容器可放入为宜。放置水龙头下流水冲洗1-2小时(可加入吐温等表面活性剂以提高清洗效果),冲洗时间取决于材料的清洁程度。容易漂浮或细小的物料,可用纱布袋装好冲洗。水洗对于严重污染物料尤其有用。

  ②材料消毒,在超净工作台上,先用酒精处理材料进行表面浸润(由于酒精的渗透能力很强,不同材料应注意控制浸润时间)。材料的灭菌处理然后使用所选杀菌剂。材料不同,灭菌剂的灭菌时间也不同。摸索式的调整是必要的。特定的运作程序是:

  将水洗后的物料放入灭菌培养瓶,然后倒入所选消毒液,轻轻搅动培养瓶,使物料与消毒液充分接触,排出泡沫,使消毒彻底。过了时间,消毒液要倒入备好的容器中,要注意不能将物料倒出,倾净后立即倒入无菌水,轻搅涮。洗涤时间和次数根据洗涤材料和洗涤液的选择确定。

  ③无菌水冲洗法

  用预先准备好的无菌清水涮洗物料,涮洗时间为每次2-5 min左右,同时根据所用消毒液的种类,涮洗约3-l0次(对于易去除的消毒液,洗3-5次即可,对于难以去除的消毒液,应洗8-10次)。无菌水洗是为了消除杀菌剂杀伤植物细胞的副作用。

  3.植物组织培养外植体灭菌处理的注意事项:

  1.灭菌时间:从倒人消毒液起,直至倒入无菌水。必须记录时间,以便比较消毒效果和随后调整试验条件。

  2.有时需要在消毒液中加入吐温-80等表面活性剂,这些表面活性剂的主要作用是使消毒液更易展开,更易浸人于消毒材料的表面。但是加入后对材料的伤害也在增加,一定要注意用量和灭菌时间,一般情况下表面活性剂加入灭菌液的量不能超过0.6%。

  3.酒精渗透性很强,幼嫩的材料容易在酒精中变绿,因此浸泡时间不可过长,防止酒精杀死植物的组织细胞。

  4.氯化汞除外,可在短期内贮存。其它消毒剂应在使用前与之按比例混合。


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