甘蔗茎尖脱毒组培苗保绿实验的研究

　　甘蔗是无性繁殖作物，常规育种利用种茎繁殖，繁殖系数低，用种量大。应用植物组织培养技术可以大大提高甘蔗的繁殖系数。对加速繁殖甘蔗良种，具有重要的意义。而甘蔗茎尖脱毒组培苗在繁殖过程中受影响的因素很多，其中生根阶段又是甘蔗组培苗繁殖生长的最后一关，生根质量的好坏直接影响甘蔗组培苗的假根成活率，也就影响到甘蔗良种的繁殖数量，因此，本文主要探讨几种重要物质对甘蔗生根效果的影响，另外对甘蔗的保绿质量的好坏，对甘蔗的良种繁殖也有很重要的影响：延长种苗种植时间;提高种苗成活率;使其生命力增强;抗逆性增高，着手探讨其对甘蔗组培苗保绿效果的影响。结果发现：其对甘蔗组培苗确实有保绿效果。

　　1 . 材料与方法

　　1.1 参考材料：云蔗99-601

　　1.2 甘蔗茎尖脱毒组培苗生根实验

　　取生长整齐，均匀，继代数一致，每瓶苗数一致的云蔗99-601茎尖脱毒苗在MS培养基中进行生根实验。方案如下：

　　①：不同NAA浓度对云蔗99-601茎尖脱毒苗生根的影响，共设6个浓度，分别为0，1，1.5，2，3，3.5，mg/L，每浓度30瓶。

　　②：不同的IAA对云蔗99-601茎尖脱毒苗生根的影响，共设6个浓度分别为0，0.5，2，3，4，5，mg/L，每浓度30瓶。

　　③:不同的浓度的硅对云蔗99-601茎尖脱毒苗生根及保绿的影响，共设11个浓度，分别为0，0.05，0.1，0.2，0.3，0.5，1，1.5，1.8，2.3，3mg/L，每浓度30瓶。

　　④：NAA和硅配合对云蔗99-601生根和NAA和保绿的实验，共设6个浓度分别为：0，0.3，0.5，1，1.5，2mg/L的硅，各加上MS+NAA2mg/L，每浓度30瓶。

　　⑤：沙床种植试验：取上述1.2中各浓度的NAA,IAA,硅的组培甘蔗苗，各取10瓶进行沙床种植。每对照2行，共42行。

　　2 . 结果分析

　　2.1.1.不同NAA浓度对云蔗99-601茎尖脱毒苗生根的影响列在表1。

　　表1.接种33天后不同NAA浓度对云蔗99-601茎尖脱毒苗生根

　　从表1可以看出：NAA浓度不同，其对甘蔗茎尖组培苗生根的影响也不同，以2mg/L的NAA对云蔗99-601的生根影响效果最好。

　　2.1.2.不同浓度的IAA对云蔗99-601茎尖脱毒苗生根的影响列在表2

　　从表2可以看出IAA对甘蔗生根有一定的影响，随着IAA浓度的增加，甘蔗的生根效果越来越好,到2mg/L时生根最好：根浓而密，较粗壮;苗墨绿;黄叶基本没有。以后随着IAA浓度的增加，甘蔗的生根效果越来越差。

　　2.1.3.不同浓度〔1-3mg/L〕的硅在不同时间对云蔗99-601生根的影响列在表3

　　表2不同浓度的IAA对云蔗99-601茎尖脱毒苗生根的影响

　　表3不同浓度〔1-3mg/L〕的硅在不同时间对云蔗99-601生根的影响

　　从表3可知：30天之内，各浓度的硅促进生根的差别不明显，但较长时间(如40天)，各浓度的硅促进生根的差别较明显，以1mg/L的促进生根的效果最好。

　　另外，在各时间段，不同浓度的低浓度硅〔浓度分别为0，0.05，0.1，0.2，0.3，0.5mg/L 〕对云蔗99-601生根差别也不明显。生根率都在40%-60%之间，其中以0.5mg/L的促进生根相对较好，达到59%。

　　比较硅和NAA的甘蔗苗，发现各浓度的硅都对甘蔗苗的保绿效果明显，明显高于各浓度NAA的培养基的甘蔗苗，在培养基中加入硅的甘蔗苗明显地黄花少，长势好，而其中只加入NAA的明显地黄花多，长势弱，差别非常明显。其中以加入0.4-0.5mg/L的硅保绿效果最好;比较各浓度的IAA和NAA甘蔗苗，发现IAA仍有部分的保绿效果，但没硅明显。

　　左为IAA，由左至右的浓度分别为:0.52345mg/L，右为NAA由左至右的浓度分别为:11.5233.5 mg/L

　　2.1.4.NAA和硅配合对甘蔗生根及保绿的影响试验：

　　按保绿来看：接种80后天以MS+ Si0.5mg/L的效果最好，苗绿少，明显地苗壮，与其它浓度对照差异非常明显;

　　按生根情况来看，以MS+NAA 2mg/L+Si1mg/L的生根最好，具体情况如下表

　　表4：.NAA和硅配合对甘蔗生根的影响

　　2.1.5.各浓度的NAA,IAA,硅培养的云蔗99-601茎尖脱毒苗组培，组培苗的沙床种植试验，由NAA 3.5，3，2，1.5，1.0，mg/L各取10瓶，IAA 5,4.3,2,0.5,mg/L各10瓶。硅3，2.3，1.8，1.5，1，0.5，0.4，0.3，0.2，0.05，mg/L各取10瓶，沙床种植，每种对照种两行，共42行，沙床种植30天后，统计结果如下：

　　从长势方面看：培养基中加硅0.2-3mg/L甘蔗苗的长势明显高于加人IAA和NAA的，培养基中加NAA的长势最差，加IAA的次之，加硅的最好。但培养基中加NAA 3mg/L和NAA 2mg/L的甘蔗苗明显茎粗。在所有沙床种植甘蔗苗中，以MS培养基(不加其它物质)长势最差，苗细而弱，倒伏多，死亡率高，以加NAA3mg/L的茎最粗，培养基中加NAA 3mg/L，和NAA 2mg/L的沙床种植甘蔗苗长势不明显，在培养基中加硅0.4，0.5，1，1.8，2.3mg/L的沙床种植甘蔗苗的长势差别不明显，其中以培养基中加入硅1mg/L 和硅1.5mg/L的株茎最高，长势也最好，在MS培养基中加入IAA 的长势仅次于硅，MS中加入IAA 3mg/L和IAA 2mg/L的变化不明显，但它们如和加IAA 4mg/L和IAA 5mg/L的相比变化却很明显。长势明显高于后者。

　　3 .小结与讨论

　　目前，甘蔗的良种繁殖除了采用常规的种茎繁殖以外，就是采用组织培养生物技术进行良种快繁，组织培养生物技术繁殖速度快，能保持良种的种性，可以克服常规的种茎繁殖率低的缺点，而且还可以生产出无病虫害的健康种苗。在甘蔗组织培养的整个过程中，甘蔗组培苗沙床生根阶段的生根质量的好坏，和种苗的保绿状况，直接影响到甘蔗组培苗假植成活率。本文主要探讨NAA,IAA,Si对甘蔗组培苗的生根，以及沙床种植后甘蔗苗长势的影响，也对硅的促进生根及保绿作用作了一些探讨。较高浓度(﹥0.0001mg/L)的NAA能促进生根，在MS培养基中加入2 mg/L的NAA对云蔗99-601的生根效果最好;低浓度(﹤50mg/L)的IAA具有降低木质素，增加纤维素含量的作用，对甘蔗的茎尖脱毒苗的生根有一定的效果，并且，它对甘蔗的保绿也有一定作用，但它在促进生根方面不如NAA;在保绿方面不如硅;研究中还发现：6-BA可有效地诱导芽的萌发，对甘蔗茎尖脱毒组培苗的生根有抑制作用，因凡是MS中加入6-BA的，都没有生根，而对照组(MS培养基)部分生根，生根率44%;硅对甘蔗茎尖脱毒组培苗的生根有促进作用，以1mg/L的效果最好。虽效果稍逊于NAA，但它能使叶绿体，基粒片层增大增多，使线粒体数增多，对组培苗的保绿有较好的效果 ，关于硅对甘蔗保绿的影响，是本实验的一个亮点，国内外还没有类似的报道;在2 mg/L NAA和各浓度的硅的配合实验时，也是以0.5 mg/L的硅保绿效果最好;因NAA可使根活力下降，所以沙床种植时苗的长势并不很好。

　　因此，甘蔗茎尖脱毒组培苗在生根和繁殖过程中，要严格按照以上的要求进行，才有利于提高组培苗的成活率。