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格艾特带您了解常规的组织培养技术

   作者:组织培养   发布时间:2021-01-12 09:17:32   浏览次数:2

返回:公司新闻

  植物细胞和组织培养的技术性强,要求无菌操作,通过本实验可初步掌握常规的组织培养技术,加深对无菌操作的了解.

组织培养

  植物的全能性:植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一个完整植株的能力,称为植物的全能性.

  植物组织培养就是利用植物的全能性进行离体无菌植物培养的一门技术.植物组织培养按其原始意义,就是指愈伤组织培养.但发展至今,其范围日益扩大,已包括植物和它的离体器官、组织、细胞和原生质体的离体无菌培养.因此,拥有几种不同水平的培养技术,即整体的、器官的、组织的、细胞的和原生质的培养技术.它们的涵义是:

  1.植株培养.指以具备完整植株形态的材料(如幼苗和较大的植株)外植体的无菌培养.

  2. 胚胎培养.指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养.

  3. 器官培养.指以植物的根,茎,叶,花,果等器官为外植体的离体无菌培养,如根的根尖和切段,茎的茎尖,茎节和切段,叶的叶原基,叶片,叶柄,叶鞘和子叶,花器的花瓣,雄蕊(花药,花丝),胚珠,子房,果实等的离体无菌培养.

  4. 组织培养.指以分离出植物各部位的组织(如分生组织,形成层,木质部,韧皮部,表皮,皮层,胚乳组织,薄壁组织,髓部等),或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养.这是狭义的组织培养.

  5. 细胞培养.指以单个的游离细胞(如用果酸酶从组织中分离的体细胞,或花粉细胞,卵细胞)为接种体的离体无菌培养.

  6. 原生质体培养.指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养.

  仪器设备:

  1.酒精灯、100ml三角烧瓶,9厘米培养皿;

  2.镊子、剪刀、解剖针;

  3.双筒解剖显微镜;

  4.光照培养箱或温室;

  材料和试剂:

  1.材料 烟草无菌苗、豌豆幼苗.

  2.试剂

  (1)MS培养基,植物激素:NAA、6-BA等;

  (2)饱和漂白粉液(次氯酸钠);

  (3)70%酒精、100%酒精、酒精棉球;

  (4)无菌水

  实验步骤:

  1.烟草无菌苗的快速切繁—继代培养:(要求完全无菌操作)

  每组一瓶烟草无菌苗,请细心操作,以免污染.

  (1) 在实验台上,点着酒精灯,将双手用酒精棉球擦拭消毒,打开生长好无菌烟草苗的三角瓶,三角瓶的瓶口使用前后需在酒精灯外焰上烧过灭菌.

  (2) 用灭菌的镊子轻轻捏出1株幼苗,用灭菌的剪刀将无菌苗剪成0.5-1厘米的小段,要求每段至少包含一个生长点,直接剪入盛有MS培养基的三角瓶中,每一个切段必须直接接触培养基,三角瓶口重新烧过灭菌,并重新封好口.

  (3) 在光照培养箱中15~25℃,16小时光照条件下培养4周,可长成完整植株,能用于田间移栽.

组织培养

  2.豌豆苗的茎尖培养

  ⑴ 取发芽6天的豌豆幼苗10株,简取1厘米左右的茎尖,浸入70%的酒精中1分钟,再浸入饱和次氯酸钠溶液中消毒15分钟,(此步以后要求无菌)用无菌水中冲洗5次,在灭菌的滤纸上吸干水分,放入灭菌的培养皿中.

  ⑵ 在双目解剖镜下,用灭菌的解剖针剥去幼叶露出生长锥,用灭菌的解剖针挑取带着两至三个叶原基的生长锥.

  ⑶ 将挑好的茎尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L 6-苄基腺嘌呤(6-BA)的培养基上诱导愈伤组织形成,用封口膜将培养皿封好.在恒温培养箱中,26℃下,培养六周,形成愈伤组织,经继代后,可用于生根培养.


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