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济南格艾特组培设备公司讲解细胞培养操作步骤

   作者:zhuobo   发布时间:2021-06-29 17:31:27   浏览次数:1

返回:公司新闻

  原代培养及操作步骤

  原始分离细胞培养是指将组织从供体中取出,经机械和消化分离为单个细胞或单一细胞型细胞群,使之能在体外模拟人体的生理环境,在无菌、适宜的温度和一定的营养条件下存活,成长与繁殖原代培养细胞常具有不同的细胞成分,生长缓慢,但更能代表所产生的组织细胞类型和表达组织特异性。用原代细胞培养法进行各种实验,如药检、细胞分化、病毒学检测等。济南格艾特组培设备公司介绍具体的实施步骤如下。

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  1.剪切组织首先用D-Hanks或 Hanks液体清洗得到的组织,除去表面的血污,并用外科手术钳除去那些不需要培养的组织,例如粘着的结缔组织。

  再洗一次后,用手术刀将这些组织切成许多小块,放入青霉素瓶或小烧杯中,加入适量的缓冲液,用弯刀剪,反复剪切这些组织,直到形成糊状,约1mm3大小。静置一段时间后,用吸管吸掉上面的液体,加入合适的缓冲液,再进行清洗。

  2.消化分离分离的目的是将组织块细小的组织块分离为细胞团或单个细胞,以便于进一步培养,目前常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。

  3.利用细胞悬液的计数板进行细胞计数。通过调节细胞数量到(2~5)×105 cells/ml,或实验所需的密度,在培养瓶中分装细胞悬液量,使细胞悬液量稍高于培养瓶底为宜。放入CO2培养盒,5%CO2,37℃静置培养。通常在3~5天内,原代培养细胞就能粘附于瓶壁,并展开生长,补加原培养液量1/2的新培养液,继续培养2~3 d后再换液,一般7~14天就能长满瓶壁。

  4.济南格艾特组培设备公司讲解注意事项

  (1)无菌操作:细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因,每个环节都要加强无菌操作观念,预防为主,一旦污染,一般很难消除。

  (2)培养液:所用的培养液必须满足细胞生存和生长的要求。不同来源的动物、组织类型对培养液的要求也有所不同,必要时可采用预实验的方法来选择合适的培养液。

  (3)小牛血清:小牛血清在维持培养细胞存活和促进细胞增殖方面发挥着重要作用。可以选择不同批号的小牛血清用于小样本分析。在确定了某一生产厂家的特定批次小牛血清后,保持应用直到试验结束。

  (4)胶原酶溶液:需新鲜配制,储存时间太长(甚至-20℃低温保存),也会影响消化的效果,导致消化时间延长,细胞损伤程度增加。

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  济南格艾特组培设备公司讲解的原代培养及操作步骤,大家如果对细胞培养操作步骤感兴趣可以持续关注我们!


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