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培养架的注意事项!

   作者:创始人   发布时间:2022-08-12 17:07:13   浏览次数:1

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  1. 培养基架配制注意事项

  植物组织培养最常用MS培养基,包含十几种化合物。有些化合物相遇会发生化学反应产生沉淀,影响培养基的营养成分,所以MS培养基需要配制多种高倍母液。

  配制母液时,尤其涉及大量元素的母液时,一定要等一种成分溶解之后,再缓慢的添加另一种成分;切记一锅煮,即不能将各种化合物一齐添加进去。

  2. 灭菌后培养基不凝胶或者凝胶偏软

  植物凝胶、琼脂都对酸性条件敏感,pH 值低于5很难成胶或凝胶偏软,切记高压灭菌前调节培养基 pH 值(5.5 - 6.0)。植物凝胶对二价阳离子浓度有要求,也就是相对于 MS 培养基,1 / 2 MS 培养基中植物凝胶要适当增加用量。

  另外灭菌后,倒出培养基前一定将培养基摇匀(带防烫手套),因为琼脂密度大底层含量高,容易造成培养基强度不均匀。

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  3. 水解酪蛋白有酸水解和酶水解之分,在使用过程中有无区别?

  水解酪蛋白对胚状体、不定芽的分化有良好的促进作用,通常用量在 500 mg/L,不管是酸解还是酶解,作用都是一样的,酶解更有利于发挥其作用。

  4. 怎么溶解组培常用植物激素?

  IAA、IBA、GA、玉米素、多效唑等应先溶解于少量 95% 的乙醇中,再加水定容配制成母液。

  如有结晶析出,可考虑用 1 / 10 体积的乙醇溶解后再定容;2,4 -D 易溶于碱性水溶液,可用少量 1mol/L 的 NaOH 溶液溶解后再慢慢加水定容;KT 和 6 -BA 先用少量的 HCL 溶解,再加水定容到一定的浓度。

  5. 细胞分裂素使用浓度?

  一般情况下在培养基中加入 0.1~10.0 mg/L 的细胞分裂素(6 -BA/KT/ZT),多数用 1.0~2.0 mg/L,KT 浓度为 0.5~2 mg/L,浓度要根据实验材料来调整。细胞分裂素可以单独使用也可以与细胞生长素配合使用。

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